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耐热反转录酶图片
产品货号:
MT0120
中文名称:
耐热反转录酶
英文名称:
ThermoStable Reverse Transcriptase
产品规格:
20kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本反转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了RNase H活性中,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强(最佳活性温度55℃),耐热反转录酶在65℃条件下仍然有部分活性。相比于低温条件下反转录反应,采用高温反转录可显著打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,从而提高后续检测的灵敏度。



单位定义

以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37℃条件下,10分钟内催化1nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。




组分规格
ThermoStable RTase(200U/μL)100μL
10×RT Buffer400μL

保存:-20℃,有效期1年。


10mM Tris-HCl(pH7.5),150mM NaCl,2mM DTT,0.1mM EDTA,0.02% Tween20,15%海藻糖。


  • 本制品可在-20℃稳定保存1年,-80℃可保存3年,短期使用于4℃保存(1个月)。该制品反复冻融10次,不影响性能。
  • 本制品可与Taq DNA聚合酶组合,用于One-Step RT-PCR,推荐的RT温度为55~60℃,RT时间为5min,在反应体系中酶的终浓度0.5~2U/μL。



  • 按下表加入各成分配制反转录反应体系:
    成分用量
    ThermoStable RTase(200U/μL)1μL
    10×RT Buffer2μL
    dNTP Mixture (10mM each)1μL
    Total RNA or Poly(A) RNA0.1~2μg
    20×Oligo dT(25)&Random Primer1μL
    RNase inhibitor (40U/μL)0.2μL
    RNase-Free H2O至20μL
    • Oligo dT(25)使用浓度为20~50μM,如使用Random9随机引物可使用125μM,基因特异性引物可使用5μM。
  • 在PCR仪上按以下程序进行反转录反应
    温度时间
    30℃5min
    37~65℃15~30min
    85℃5min
    • 推荐的反转录温度设置为55℃,无论是高GC或长片段模板,均可获得综合性的cDNA产量。
  • 反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于-20℃。



耐热反转录酶
图1.以人类RNA为模板,应用耐热反转录酶和M-MuLV反转录酶分别在50℃、55℃、60℃和65℃进行反转录反应,反应时间为15min,然后进行PCR扩增获得542bp的片段
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